El presente proyecto de investigación está orientado a cubrir parte del vacío de información existente a través de la búsqueda y caracterización de agentes biológicos asociados con el disturbio y el análisis de la diversidad genética en plantas sintomáticas y asintomáticas.

Cinco áreas de bosque afectado por mal del ciprés en el valle de El Bolsón fueron elegidas para un muestreo pareado de individuos que difieren en la sintomatología, en tanto que comparten tamaño y posición sociológica en un ambiente que puede considerarse uniforme en sus características de microclima y micrositio.

Un total de 50 pares de plantas fueron seleccionados evaluándose en ellos la presencia de agentes bacterianos en xilema mediante un ensayo de PCR para el gen 16S rRNA. La secuenciación de fragmentos amplificados relevó la existencia de poblaciones bacterianas complejas, por lo que el estudio fue ampliado empleando la técnica de DGGE para caracterizar las poblaciones bacterianas de xilema en 15 de los pares de plantas seleccionados.

La técnica de RGAPs (resistance gene analogs polymorphisms) está siendo empleada en los 50 pares de plantas para caracterizar la variabilidad genética como paso previo a la selección de marcadores genéticos. Las combinaciones de primers utilizadas están basadas en dominios conservados de binding a nucleótidos, regiones ricas en leucina y dominios de kinasa presentes en proteínas de respuesta a enfermedad en plantas.

Tres ensayos moleculares fueron desarrollados para agilizar la detección y caracterización de agentes bióticos asociados con el mal del ciprés: un ensayo de PCR sobre la región ITS-2 para detectar Phytophthora austrocedrae directamente desde lesiones necróticas de floema, un ensayo de PCR-RFLP para identificar a nivel de especie aislamientos de Phytophthora sp obtenidos desde suelo y cursos de agua en bosques de A. chilensis y un ensayo de PCR-RFLP para identificar dos especies de áfidos que afectan ciprés de la cordillera, Cinara cupressi y Cinara tujafilina. Estos métodos proporcionan herramientas rápidas y sensibles para estudiar la distribución de posibles agentes bióticos y clarificar la relación entre la presencia de los mismos y diferentes tipos de síntomas reportados en A. chilensis.